液相色譜柱的選擇與清潔說明
點(diǎn)擊次數(shù)：1449 更新時(shí)間：2020-05-12
液相色譜柱的液相色譜(HPLC)技術(shù)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的一種分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離和測定的重要手段。自問世以來，它以其分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高、沸點(diǎn)高但不能汽化熱不穩(wěn)定的生理活性物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，在生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)和臨床分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。液相色譜柱作為一種消耗品，隨著使用時(shí)間的延長或注射次數(shù)的增加，色譜峰高減小，峰寬增大或肩峰出現(xiàn)，柱效應(yīng)減小。需要定期進(jìn)行*的清洗和再生，并且不同的柱清洗方法也不同。如C8柱、C18柱的清洗：
液相色譜儀常用的C8柱、C18柱。當(dāng)流動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)，流速1.0ml/min沖洗30min，，柱溫保持實(shí)驗(yàn)時(shí)的溫度。
水相中有無機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)，先采用純水(或含有2%甲醇)，沖洗A管路(實(shí)驗(yàn)中采用的管路)，時(shí)間30min(如流動(dòng)相中有表面活性劑，則適當(dāng)增加時(shí)間)，流速1.0ml/min，柱溫可較實(shí)驗(yàn)溫度高出5~10℃。隨后更換成20%甲醇再?zèng)_洗30min，流速不變，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處。
實(shí)踐證明沒必要采用高比例的甲醇沖洗，因?yàn)闅堄嘤袡C(jī)相中的水相遇到高比例甲醇后在泵頭上、色譜柱中會(huì)析出少量鹽和表面活性劑，導(dǎo)致色譜柱壽命縮短。
對(duì)于液相色譜柱的選擇要注意：
1.PH值使用范圍
硅膠為基質(zhì)填料，使用時(shí)一定要注意流動(dòng)相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動(dòng)相的PH值小于2時(shí)，會(huì)導(dǎo)致鍵合相的水解；當(dāng)PH值大于7時(shí)硅膠易溶解；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱入口處會(huì)塌陷。同樣填料各種不同牌號(hào)的色譜柱不盡相同。如果流動(dòng)相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時(shí)，建議選擇PH范圍大的柱子。
2.填料的端基封尾
把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進(jìn)行端基封尾，可改善對(duì)極性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分離；填料穩(wěn)定性好了，組分的保留時(shí)間重現(xiàn)性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物，選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。
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